反義寡核苷酸（ASOs）領域是一個新興的藥物開發領域，自1978年ASOs概念出現，經過20多年的發展，ASOs才被開發成可用于商業用途的藥物。

ASOs可以與靶基因配對，通過特異性阻斷靶基因的轉錄或翻譯過程來實現基因調控。ASOs藥物具有高特異性、高效率、低毒等優點，廣泛應用于基因功能研究、藥物靶點驗證、和腫瘤治療等領域。

已上市的ASOs藥物

1. ASOs藥物主要作用機制

ASO藥物根據其作用機制可分為兩類：

RNase H介導的降解：在這種機制中，RNase H1酶識別并切割RNA-DNA樣的異雙鏈結構。為了激活RNase H，ASOs必須包含5到10個連續的脫氧核苷酸，PS連接也能激活RNase H。中心的PS-ODN間隙（8-10個核苷酸）兩側被2′-修飾的核苷酸（如MOE、LNA或cEt）所夾持，這些修飾增加了穩定性和親和力，形成gapmer結構。PS連接和2′修飾會降低RNase H活性，導致這些反義寡核苷酸變為僅占位寡核苷酸，從而調節剪接。

可變剪接：發生在僅占位的寡核苷酸（如nusinersen和PMO類藥物，如eteplirsen、golodirsen、viltolarsen和casimersen）中，這些寡核苷酸與前體mRNA結合并阻止剪接體，誘導外顯子包含或跳過。這一機制用于治療脊髓性肌萎縮癥（SMA）和杜氏肌營養不良癥（DMD）等疾病。

ASOs作用機制圖

ASOs藥物在研發過程中為了確保ASOs藥物的療效和穩定性，可以對其進行ASOs設計、化學修飾等方法，最大限度地提高ASOs藥物的療效，確保其在臨床應用中的安全性和長期有效性。

ASOs設計

ASOs的設計是決定其療效和特異性的核心。設計時主要考慮以下因素：

序列特異性：確保ASOs僅與目標RNA結合，避免與其他基因的非特異性結合。

穩定性與親和力：優化ASOs的化學結構以提高其在體內的穩定性，避免快速降解，同時增強與靶RNA的結合親和力。

抗脫靶效應：確保ASOs對非靶RNA的干擾最小化，減少副作用。

ASOs化學修飾

ASOs主要有堿基修飾、糖修飾和linker修飾。不同修飾各自有助于優化ASOs的治療潛力，可提高ASOs的穩定性、療效和安全性。

Linker修飾：集中于穩定ASOs的骨架，防止外切酶的降解，改善分子的藥代動力學性質。

堿基修飾：影響ASOs與靶RNA的特異性結合，增強親和力和選擇性。

糖修飾：主要通過保護糖骨架不被降解來提高ASOs的穩定性，從而延長其半衰期。

ASOs經過化學修飾之后，大大地提高穩定性、靶向性，減少降解產物，最大限度降低不良反應的可能性，提高 ASOs的整體安全性。

ASOs化學修飾

2. ASOs藥物的臨床應用

脊髓性肌萎縮癥（SMA）

SMA是由于SMN1基因功能缺失引起的，SMN2基因雖然產生一定量的全長SMN蛋白，但由于外顯子7跳過，常常產生短小且不穩定的蛋白。Nusinersen是一種2′-MOE修飾的PS ASO，通過促進SMN2前體mRNA的外顯子7包含，從而恢復全長SMN蛋白的產生。

杜氏肌營養不良癥（DMD）

DMD是由于基因的突變導致其閱讀框破壞，產生提前的終止密碼子，導致基因表達中斷。Eteplirsen通過與DMD前體mRNA的外顯子51結合并使其跳過，從而恢復功能性，但較短的肌營養不良蛋白。同樣，golodirsen和viltolarsen通過與外顯子53結合，casimersen通過與外顯子45結合，促使這些外顯子跳過，恢復肌營養不良蛋白的表達。

肌萎縮側索硬化癥（ALS）

ALS也稱漸凍癥，ALS患者常伴有進行性肌肉無力及消瘦癥狀，具有局灶性發作并擴散至身體不同區域，常因呼吸肌衰竭致死 。2023年4月，美國FDA加速批準治療SOD1相關ALS的ASOs藥物Tofersen（商品名：Qalsody）上市。Tofersen通過誘導RNase H介導SOD1 mRNA降解，以減少ALS 患者SOD1蛋白的合成，使患者腦脊液SOD1濃度以及血漿中受損神經元釋放的神經絲輕鏈濃度的顯著降低，患者呼吸功能和肌肉力量的下降速度得到改善 。

遺傳性轉甲狀腺素蛋白介導的淀粉樣變多發性神經病變（ATTRv-PN）

轉甲狀腺素蛋白（transthyretin，TTR）是一種血漿載體蛋白，可運載甲狀腺素和維生素A至全身各個組織和細胞。ATTRv-PN是一種TTR突變引起的以周圍神經損害為主的多系統疾病，其特征是TT不穩定性水解、錯誤折疊并引起淀粉樣蛋白原纖維在細胞外沉積導致細胞被破壞，進而引起周圍神經系統為主的損害，干擾組織的正常功能。Eplontersen通過3 個N-乙酰半乳糖胺（Nacetylgalactosamine，GalNAc）配體靶向肝臟組織，與野生型及突變型TTR mRNA結合并誘導RNase H介導其降解以減少循環TTR蛋白，從而降低患者淀粉樣蛋白的沉積水平。

3. 泓迅生物ASOs合成服務

泓迅生物建立了符合ISO9001和ISO13485質量管理要求的生產車間，擁有標準的生產流程，精湛的合成及純化工藝。合成的ASOs均嚴格執行QC檢測標準，通過HPLC純度檢測，以確保高質量的ASOs產品輸出。

服務優勢

●豐富的修飾類型

●μg-g合成規格

●HPLC和LC-Mass分析

參考文獻

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